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標簽: 甲基化 特異性 PCR
DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作為甲基供體,將胞嘧啶轉變為5-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯yi存在的化學性修飾堿基。
實驗方法原理 | MSP是一種簡便、特異的、敏感的檢測單基因甲基化的方式。其基本原理是用亞硫酸氫鈉處理基因 組DNA,未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變,然后用3對特異性的引物對所測基因的同一核苷酸序列進行擴增。擴增產物用DNA瓊脂糖凝膠電泳,凝膠掃描觀察分析結果。 |
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實驗材料 | DNA |
試劑、試劑盒 | 亞硫酸氫鈉、氫醌、石蠟油、乙醇 |
儀器、耗材 | 水浴鍋、PCR儀 |
實驗步驟 | 1. 在50 μl 體系中,DNA(2~5 μg)經NaOH(終濃度值0.2 mol/L)在37℃變性10 Min。
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